Description complète de la méthode de réaction en chaîne de la polymérase

La réaction en chaîne de la polymérase (PCR) est la création de plusieurs copies d’une courte section d’ADN humain. Une petite quantité de matériel physiologique est nécessaire à la recherche et à l’obtention de résultats: expectorations, sang, liquide amniotique, salive, urine, etc.

Qu'est-ce qu'une réaction en chaîne par polymérase?

La méthode PCR a été mise au point par le scientifique américain Melison, qui a reçu le prix Nobel en 1998 pour son développement. Activement utilisé:

• avec le diagnostic précoce des infections, des pathologies oncologiques;
• lors d’un examen médico-légal pour l’étude d’une très petite quantité d’ADN;
• en médecine vétérinaire, biologie, génétique moléculaire;
• pour l'identification personnelle par l'ADN;
• confirmer la paternité;
• en écologie, par exemple, lors du suivi de la qualité du produit, en anthropologie.

Qui est prescrit PCR?

La réaction en chaîne de la polymérase dans le diagnostic des pathologies infectieuses est l’une des méthodes les plus fiables permettant une analyse précise et fiable. Par exemple, la fiabilité de l'analyse sur la chlamydia est proche de 100%. Le plus souvent, cette mesure de diagnostic est prescrite aux patients qui, au cours du test, ont des difficultés à identifier un agent pathogène particulier.

Les tests de laboratoire PCR utilisent:

1. Pour rechercher des organismes pathogènes qui causent une infection des voies urinaires et génitales, il est difficile de déterminer l’application lors de l’application de cultures ou de la méthode d’immunologie.
2. Pour une nouvelle analyse du VIH au stade initial avec un résultat positif, mais discutable, de l'analyse initiale, par exemple chez les nouveau-nés de parents infectés.
3. Établir une pathologie oncologique à un stade précoce et corriger individuellement le schéma thérapeutique chez les patients.
4. Pour la détection précoce et le traitement potentiel des pathologies héréditaires. Ainsi, beaucoup de futurs parents testent pour savoir s'ils sont porteurs de maladies génétiques. Chez les enfants, cette méthode détermine la probabilité d'exposition à des maladies héréditaires.

En outre, cette technique est utilisée:

• pour la détection de pathologies fœtales en début de grossesse;
• chez les patients avant une opération de transplantation d'organe - nécessaire pour déterminer la compatibilité des tissus
• détecter des agents pathogènes dangereux dans le sang du donneur;
• chez les nouveau-nés pour détecter les infections cachées;
• évaluer les résultats du traitement antiviral ou antimicrobien.

Pourquoi passer par cette procédure?

La PCR étant considérée comme une méthode de diagnostic très efficace donnant des résultats proches de 100%, cette procédure est utilisée:

1. Pour confirmer ou exclure le diagnostic.
2. Pour une évaluation rapide de l'efficacité du traitement.
3. Dans de nombreux cas, cette méthode est considérée comme le seul moyen possible de détecter une pathologie en développement, si d'autres techniques bactériologiques ou virologiques se sont révélées inutiles.
4. Les virus utilisant la procédure PCR sont détectés immédiatement après l’infection et avant l’apparition des symptômes principaux.
5. La détection précoce des micro-organismes permettra un traitement rapide.

De plus, l’analyse PCR vous permettra de détecter rapidement un petit nombre de micro-organismes dans des échantillons vivants ou morts. Par conséquent, cette technique est utilisée pour rechercher un organisme pathogène spécifique, par exemple un bacille tuberculeux.

De plus, l'analyse PCR est utilisée:

• déterminer la sensibilité de l'ADN à des types spécifiques d'antibiotiques, ce qui permettra de commencer le traitement aussi rapidement que possible;
• contrôler la propagation des épidémies;
• identifier et suivre de nouveaux types de microbes, agents pathogènes.

Les principaux types de PCR

Méthode standard

L'analyse PCR est réalisée sur la base du doublage multiple d'un fragment d'ADN spécifique et d'un ARN en utilisant les enzymes d'amorçage. Grâce à cela, le chercheur reçoit la quantité de matériel requise.

PCR en temps réel

Dans ce type de recherche, le processus d'identification d'un fragment donné est démarré après chaque cycle. Ce type de recherche permet d’obtenir des informations sur le nombre de virus et de micro-organismes dans le corps, c’est-à-dire d’effectuer une analyse quantitative.

Mode de transcription inverse de PCR

Cette analyse est utilisée pour rechercher un ARN simple brin afin de détecter plus avant les virus dont la base génétique est appelée ARN. Par exemple, il s’agit du virus de l’hépatite C, de l’immunodéficience, etc. Dans le cadre de cette étude, une enzyme spéciale est utilisée, grâce à laquelle l’ADN monocaténaire est construit. Le système restaure ensuite le deuxième brin d'ADN et effectue la procédure traditionnelle.

Indications pour

La procédure PCR est utilisée dans les cliniques de maladies infectieuses, obstétrique, urologie, gynécologie et néphrologie, pédiatrie, etc. Les indications les plus courantes pour l'analyse des assignations sont les suivantes:

• déterminer le risque de développer des anomalies génétiques chez un enfant en présence de pathologies héréditaires;
• diagnostiquer les deux parents lorsqu'ils planifient une grossesse ou lorsque la mère est dans une situation difficile lorsqu'elle porte un enfant;
• avec les difficultés de conception pour identifier les causes de l'infertilité;
• en cas de suspicion d'infections sexuelles au stade aigu ou à risque de passage au stade chronique;
• détecter les causes de processus inflammatoires d'origine inconnue;
• avec des rapports sexuels occasionnels non protégés;
• déterminer la sensibilité d'un microorganisme pathogène à un médicament spécifique;
• infection présumée latente pour détecter des agents pathogènes sans symptômes évidents;
• pour confirmer le rétablissement d'une maladie, c'est-à-dire un diagnostic rétrospectif.

La PCR est également utilisée lorsqu'il est nécessaire d'identifier avec précision des agents pathogènes tels que: virus de l'hépatite, déficit immunitaire humain, cytomégalovirus, virus de l'herpès simplex, virus de la rubéole, virus du papillome.

Ici, cette méthode est utilisée pour détecter des infections: mononucléose infectieuse, encéphalite à tiques, candidose, provoquée par des champignons candida, infections génitales et tuberculose.

Si contre-indications et méthode sûre?

Étant donné que cette procédure est réalisée sans aucun impact sur le corps et que seul du matériel biologique utilisé pour la recherche est utilisé, il n’ya pas de contre-indication en raison de l’absence de danger potentiel pour le corps. Mais par exemple, l'échantillonnage de biomatériau du canal cervical de l'utérus n'est pas effectué après une colposcopie. Les frottis d'accouchement et les raclures ne sont autorisés que 4 à 7 jours après la fin des menstruations et la cessation complète du congé.

Caractéristiques de la préparation à la procédure

En tant qu'échantillon pour l'analyse PCR, dans lequel l'ADN d'un agent pathogène étranger est détecté, un fluide biologique ou un tissu est utilisé. L'ingestion de la substance à tester prend la forme d'un prélèvement de sang dans une veine, d'un grattage dans la cavité nasale, du larynx, du col utérin, de l'urètre. Avant la procédure de diagnostic, le médecin doit expliquer au patient le matériel à prendre:

• dans l'analyse des infections herpétiques, la mononucléose prend une analyse de l'urine, ainsi qu'un frottis du pharynx;
• lors du dépistage de l'hépatite ou de la toxoplasmose, le sang est prélevé dans une veine;
• pour diagnostiquer divers types de lésions du système nerveux central, le liquide céphalo-rachidien est prélevé;
• en pneumologie, les échantillons pour l'analyse PCR sont le liquide pleural et les expectorations;
• s'il effectue une étude sur les infections intra-utérines pendant la grossesse, le liquide amniotique et les cellules placentaires sont utilisés pour l'analyse.

La fiabilité et la précision du résultat dépendent de la stérilité et des conditions de prélèvement du biomatériau. Comme les études PCR sont très sensibles, toute contamination de la substance absorbée peut fausser les résultats. Une préparation compétente pour la délivrance du biomatériau ne pose aucun problème pour le patient.

Mais il y a un certain nombre de recommandations:

• lors de l'analyse des infections sexuellement transmissibles, il est nécessaire d'exclure les contacts intimes trois jours avant la livraison du matériel;
• 72 heures devraient arrêter l'utilisation de préparations vaginales;
• à partir du soir de la veille, aucune hygiène des zones étudiées ne peut être réalisée;
• 3-4 heures avant de prélever un échantillon de l'urètre, la miction doit être exclue;
• un mois avant les tests, vous devez arrêter de prendre des antibiotiques;
• le sang est donné le matin l'estomac vide avant de manger et de boire;
• L'urine du matin est recueillie dans un récipient stérile après être allée aux toilettes.

Comment est la PCR?

Lors de recherches dans un réacteur spécial, un certain cycle se répète:

1. Le premier pas Dénaturation. La salive, le sang, les tests gynécologiques et d'autres substances sont placés dans l'applicateur, où le matériau est chauffé et l'ADN est divisé en deux chaînes.
2. La deuxième étape. Léger refroidissement de la substance absorbée, en y ajoutant des composants spéciaux qui reconnaissent les parties nécessaires de la molécule de DTC et s'y lient.
3. 3 étapes. Élongation Au cours du processus, un fragment de DTC de l'organisme pathogène est terminé, une copie en est formée. Ce cycle est répété, ce qui double la copie du fragment d’ADN spécifique.

En quelques heures, de nombreuses copies de ce fragment sont formées, leur présence dans les échantillons est révélée. Les résultats sont ensuite comparés aux bases de données de divers types de pathogènes. Cela vous permet de déterminer le type d'infection.

Caractéristiques de l'analyse de décodage?

Le résultat final de l'étude sera communiqué au patient plusieurs jours après l'analyse biologique.

Analyse qualitative

Un résultat négatif dans ce cas signifie qu'aucun agent infectieux n'a été détecté dans le fluide soumis aux tests. Un résultat positif indique la détection de virus ou de bactéries pathogènes dans un échantillon biologique. Si le résultat était positif, mais que, dans le même temps, la personne ne présente aucun signe d'activation de l'infection, un tel état du corps est appelé porteur sain asymptomatique.

Le plus souvent, ceci est observé lors de la prise du biomatériau dans les pathologies virales. Dans ce cas, le traitement n'est pas nécessaire, mais il nécessite une surveillance médicale constante. Puisque dans de telles conditions, il y a une probabilité:

• la propagation du virus du porteur aux personnes en bonne santé;
• activation du processus et passage de la pathologie à la forme chronique.

Analyse quantitative

Le résultat quantitatif est déterminé par un spécialiste spécifiquement pour un type d'infection particulier. Sur la base des résultats obtenus, il est possible d'évaluer le degré de développement, le stade de la pathologie, ce qui permet de prescrire un traitement le plus rapidement possible.